PCR

Prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa en cáncer gástrico

T: Polimorfismo genético de interleuquina-1: Asociación con cáncer gástrico en la población de alto riesgo del Centroccidente de Venezuela.

O: Analizar las frecuencias genotípicas de los polimorfismos de IL-1B-511, IL-1B+3954 e IL-1RN para determinar su asociación con el riesgo de desarrollar CG en residentes de la región centroccidental de Venezuela.

 M: Biopsia gástrica antral.

 AN: ADN genómico.
Tratamiento con xileno, mediante el QIA-amp tissue Kit (Qiagen), Wizard Genomic DNA Purification Kit (Promega).

 G:
IL-1B-511
IL-1B+3954
IL-1RN

PCR: PCR-RFLP

 IL-1B-511: Iniciadores: 511F: 5'- TGGCATTGACTGGTTCAC-3'. 511R: 5'- GTTTAGGAACTTCCCACTT-3'. Condiciones de PCR, enzimas de restricción y definición de los alelos*: 3 min a 94°C, 35 (40) ciclos de 45 (60) seg a 94°C, 45 (90) seg a 57°C, 30 (90) seg a 72°C, seguido de 10 min a 72°C; PCR-RFLP (Aval); C alelo: 106 pb y 199 pb; T alelo: 305 pb.

IL-1B+3954: Iniciadores: 3954F: 5'- GTTGTCACAGACTTTGACC- 3'. 3954R: 5'- TTCAGTTCAAGGACCAGA- 3'. Condiciones de PCR, enzimas de restricción y definición de los alelos*: 3 min a 94°C, 35 (40) ciclos de 45 (60) seg a 94°C, 45 (90) seg a 57°C, 30 (90) seg a 72°C, seguido de 10 min a 72°C; PCR-RFLP (Taql); C alelo: 135 pb y 114 pb; T alelo: 249 pb.

IL-1RN: Iniciadores: RNF: 5'- CTCAGCAACACTCCTA- 3'. RNR: 5'- TCCTGGTCTGCAGGTAA- 3'. Condiciones de PCR, enzimas de restricción y definición de los alelos*: 3 min a 94°C, 35 (40) ciclos de 30 (60) seg a 94°C, 30 (90) seg a 57°C, 20 (90) seg a 72°C, seguido de 10 min a 72°C; PCR; alelo 1- 410 pb (cuatro repeticiones), alelo 2- 240 pb (dos repeticiones), alelo 3- 500 pb (cinco repeticiones), alelo 4- 325 pb (tres repeticiones), alelo 5- 595 pb (seis repeticiones).

V: EFO


Referencias:



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